کلونینگ و بیان ژن کد‏کننده آنزیم لاکاز از باکتری باسیلوس پومیلوس سویه gaz۲۳

مقدمه: لاکازها (بنزن دیول اکسیژن اکسیدو ردوکتاز ec 1. 10. 3. 2 ) یکی از اعضا ی خانواده مالتی کوپر اکسیدازها هستند که اکسیداسیون طیف گسترده ای از ترکیبات فنولی را با استفاده از اکسیژن مولکولی کاتالیز می کنند.   مواد و روش ‏‏ ها : ژن کد‏کننده آنزیم لاکاز از سویه gaz23 به‏وسیله پرایمرهای کلونینگ اختصاصی ژن تکثیرشد. محصول pcr در ناقل بیانی ( pet21a ) کلون به باکتری اشریشیا­کلی سویه bl21(de3) انتقال یافت و تحلیل توالی انجام شد. بیان آنزیم با استفاده از سوبسترای معمول لاکاز abts سنجیده شد.   نتایج: توالی ژن s rdna 16 سویه بومی gaz23 که از خاک‏های ایران جدا شده است دارای 100 درصد شباهت به باکتری باسیلوس پومیلوس بود. ژن لاکاز در سویه gaz23 دارای 1533 نوکلئوتید است که 510 آمینواسید را کد می‏کند.   بحث و نتیجه ‏ گیری: ژن لاکاز سویه gaz23 دارای 67 درصد شباهت آمینواسیدی به پروتئین cota باکتری باسیلوس سوبتیلیس است. به منظور به دست آوردن مقادیر بالای پروتئین محلول، بیان، تحت شرایط میکروآئروبیک و در دمای پایین انجام شد. 4 دمین غنی از هیستیدین متصل شونده به مس در توالی آمینواسیدی این پروتئین وجود دارد .